最全面的分光光度计知识汇总

分光光度法是指应用分光光度计的分析方法，具有灵敏、准确、快速及选择性好等特点。

通常所测样品溶液浓度下限可达10-6~10-5mol/L，适用于测定食品中的微量组分（如肉制品中的亚硫酸盐、糖果中的二氧化硫等）。

一、原理

1.1 物质对光的选择性吸收

当光束照射到物质上时，光与物质发生相互作用，产生反射、散射、吸收或透射。

若被照射的是均匀溶液，光的散射可以忽略。

1.1.1 溶液颜色的产生

当一束白光通过某一有色溶液时，一些波长的光被溶液吸收，另一些波长的光则透过溶液。

透射光或反射光刺激人眼使人感到颜色的存在。

人把自身能感觉到的光定义为可见光。

在可见光区，不同波长的光呈现不同的颜色，因此溶液的颜色由透射光的波长所决定。

透射光与吸收光可组成白光，故称这两种光互为补色光，两种颜色互为补色。

1.1.2 光吸收的本质

当一束光照射到某物质或其溶液时，组成该物质的分子、原子或离子与光子发生“碰撞”，光子的能量就转移到分子、原子或离子上，是这些粒子由最低能态（基态）跃迁到较高能太（激发态），这个作用称为物质对光的吸收。

被激发的粒子约在10-8s后回到基态，并以热或荧光等形式释放出能量。

分子、原子或离子具有不连续的量子化能级，仅当照射光光子的能量hυ，与被照射物质粒子的基态和激发态能量之差相当时，才能发生吸收。

不同物质微粒由于结构不同而具有不同的量子化能级，其基态和激发态能量差也不相同。

所以物质对光的吸收具有选择性。

1.1.3 吸收曲线

吸收曲线，也称为吸收光谱，描述了物质对不同波长的光的吸收能力。

将不同波长的光透过某一固定浓度和厚度的有色溶液，测量每一波长下有色溶液对光的吸收程度（即吸光度），然后以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标作图，绘制的曲线即为吸收曲线。

不同浓度的同一物质，在吸收峰附近的吸光度随着浓度增加而增大，但最大吸收波长不变。

若在最大吸收波长处测定吸光度，则灵敏度最高。

因此，吸收曲线是分光光度法中选择测定波长的重要依据。